IMPORTANCIA DE LA TINCIÓN CHRISTMAS TREE EN LA IDENTIFICACIÓN DE ESPERMATOZOIDES: UNA REVISIÓN SISTEMÁTICA DE LA LITERATURA
DOI:
https://doi.org/10.56519/aewee134Palabras clave:
Agresión sexual, espermatozoides, identificación forense, Kernechtrot-picroindigocarmín, semen, árbol de navidad tinciónResumen
La identificación microscópica de espermatozoides es un tipo de análisis aplicado a evidencias asociadas con agresiones sexuales, especialmente cuando las muestras contienen mezclas celulares, poca carga espermática o signos de degradación. Entre los métodos disponibles, la tinción Kernechtrot–picroindigocarmine (KPIC), también conocida como Christmas Tree, facilita la distinción morfológica de la cabeza y la cola del espermatozoide mediante una coloración contrastante. Esta revisión tuvo como objetivo evaluar y sintetizar la evidencia científica existente sobre la utilidad analítica y operativa de la tinción KPIC para la detección microscópica de espermatozoides. Se llevó a cabo una revisión sistemática siguiendo el protocolo PRISMA 2020 y al marco PICOS. Se consultó las bases de datos Scopus, PubMed, Web of Science y Google Scholar, sin restricción de año o idioma. Se recuperó 95 registros iniciales, se eliminó 38 duplicados, se examinó 57 publicaciones y se incluyeron 13 estudios después de la evaluación a texto completo. Los resultados indicaron que KPIC es eficaz para reconocer espermatozoides, ya sean escasos, diluidos, fragmentados, presentes en fondos celulares complejos. No obstante, la heterogeneidad metodológica impidió estimar métricas combinadas de sensibilidad, especificidad y exactitud. La cantidad y calidad de las células observables se vieron afectadas por factores como el tiempo, el tipo de sustrato, la eficiencia de recuperación y la presencia de contaminantes. En comparación con otros métodos, KPIC mostró ventajas de costo, accesibilidad, contraste morfológico y compatibilidad con análisis genéticos posteriores, mientras que su dependencia del observador y la menor automatización fueron limitaciones. En conclusión, KPIC sigue siendo útil para identificar células espermáticas, pero debe complementarse con marcadores seminales, medidas de control de calidad y análisis genéticos para fundamentar una interpretación forense contextualizada.
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Referencias
Moreira N, Faria D, Fernandes J, Lourenço H, Santos N, Pinto CA, et al. Biotechnology Applied to Forensic Sciences. Applied Sciences. enero de 2026;16(12):5899. doi:10.3390/app16125899
Kayser M. Forensic genetics in the omics era. Nat Rev Genet. febrero de 2026;27(2):170–86. doi:10.1038/s41576-025-00896-1
Basset P, Blandin P, Grini A, Delemont S, Samie L, Castella V. A simplified protocol for the detection of blood, saliva, and semen from a single biological trace using immunochromatographic tests. Forensic Sci Med Pathol. el 1 de junio de 2022;18(2):141–8. doi:10.1007/s12024-021-00453-2
Samie L, Champod C, Delémont S, Basset P, Hicks T, Castella V. Use of Bayesian Networks for the investigation of the nature of biological material in casework. Forensic Science International. el 1 de febrero de 2022;331:111174. doi:10.1016/j.forsciint.2022.111174
Schulte J, Egger S, Kron S, Scheurer E, Schulz I. Evaluating novel and conventional cell-separation techniques for sexual assault investigations. Journal of Forensic Sciences. 2025;70(5):1704–20. doi:10.1111/1556-4029.70131
Davidovics R, Saw YL, Brown CO, Prinz M, McKiernan HE, Danielson PB, et al. High-throughput seminal fluid identification by automated immunoaffinity mass spectrometry. J Forensic Sci. mayo de 2022;67(3):1184–90. doi:10.1111/1556-4029.14975 PubMed PMID: 35023573.
Topping DC, Tran T, Hymus CM, Mountford NS, Liew YC, Egan SE, et al. Automated microscopy in forensic biology: Validating the use of deep neural networks for the detection of human spermatozoa in Christmas Tree stained slides. Science & Justice. el 1 de enero de 2026;66(1):101370. doi:10.1016/j.scijus.2025.101370
Tian H, Huang S, Bai P, Xiao X, Peng D, Zhao H, et al. The effect of infertile semen on the mRNA-based body fluid identification. ELECTROPHORESIS. 2021;42(16):1614–22. doi:10.1002/elps.202000238
Westring CG, Wiuf M, Nielsen SJ, Fogleman JC, Old JB, Lenz C, et al. SPERM HY-LITERTM for the identification of spermatozoa from sexual assault evidence. Forensic Science International: Genetics. el 1 de septiembre de 2014;12:161–7. doi:10.1016/j.fsigen.2014.06.003 PubMed PMID: 24997321.
Medina-Paz F, Kuba B, Kryvorutsky E, Roca G, Zapico SC. Assessment of Blood and Semen Detection and DNA Collection from Swabs up to Three Months after Deposition on Five Different Cloth Materials. International Journal of Molecular Sciences. enero de 2024;25(6):3522. doi:10.3390/ijms25063522
Fejes V, Simon G, Makszin L, Sipos K, Poor VS. Evaluation of the effect of ozone disinfection on forensic identification of blood, saliva, and semen stains. Science & Justice. el 1 de marzo de 2024;64(2):151–8. doi:10.1016/j.scijus.2023.12.005
Nolan A, Speers SJ, Murakami J, Chapman B. A pilot study: The effects of repeat washing and fabric type on the detection of seminal fluid and spermatozoa. Forensic Science International. el 1 de agosto de 2018;289:51–6. doi:10.1016/j.forsciint.2018.05.021
Nogueira TLS, Alem L, Santos OCL, Gonçalves ABR, Dias AS, Silva DA. Human semen stain analysis in casework sample by HRM-qPCR. Forensic Science International: Genetics Supplement Series. el 1 de diciembre de 2022;8:191–2. doi:10.1016/j.fsigss.2022.10.031
Leubitz SS, Savage RA. Sensitivity of Picroindigocarmine /Nuclear Fast Red (PIC/NF) Stain for Detection of Spermatozoa: A Serial Dilution Study of Human Ejaculate. Am J Clin Pathol. el 1 de enero de 1984;81(1):90–3. doi:10.1093/ajcp/81.1.90
Allery JP, Telmon N, Mieusset R, Blanc A, Rougé D. Cytological Detection of Spermatozoa: Comparison of Three Staining Methods. J Forensic Sci. el 1 de marzo de 2001;46(2):349–51. doi:10.1520/JFS14970J
Schellhammer SK, Hudson BC, Cox JO, Dawson Green T. Alternative direct-to-amplification sperm cell lysis techniques for sexual assault sample processing. Journal of Forensic Sciences. 2022;67(4):1668–78. doi:10.1111/1556-4029.15027
Hymus CM, Egan SE, Tay JW. Development of a Simple Cell Harvesting Method to Maximise DNA Recovery from Historic Microscope Slides for Sexual Assault Investigations. Forensic Sciences. diciembre de 2022;2(4):795–807. doi:10.3390/forensicsci2040057
Stern A. Sperm cytology: Kernechtrot–picroindigocarmine stain and dog semen. Journal of Veterinary Forensic Sciences. 2020;1(1):23–5. doi:10.32473/jvfs.v1i1.128311
Saeed A, Rasool N, Basel ME. Detection of Seminal Material on Hand-Washed Textile Evidence. BioScientific Review. el 14 de marzo de 2025;7(2):12–20. doi:10.32350/bsr.72.02
Humanes AC, Calil ALA, Wawruk HD, Carneiro LD, Silveira KB, Yen WC, et al. Spitz: a YOLO-based deep learning system for automated spermatozoa detection in forensic genetic analysis. Int J Legal Med. el 15 de septiembre de 2026. doi:10.1007/s00414-026-04013-7
Altmeyer L, Baumer K, Hall D. Differentiation of five forensically relevant body fluids using a small set of microRNA markers. ELECTROPHORESIS. 2024;45(19–20):1785–95. doi:10.1002/elps.202400089
Page MJ, McKenzie JE, Bossuyt PM, Boutron I, Hoffmann TC, Mulrow CD, et al. The PRISMA 2020 statement: an updated guideline for reporting systematic reviews. BMJ. el 29 de marzo de 2021;372:n71. doi:10.1136/bmj.n71 PubMed PMID: 33782057.
Athira P, Anjana C, Sona A, Prabha S, Prasad M. ADVANCING SPERM CELL DETECTION: REDUCING ANALYSIS TIME WITH DAPI STAINING IN CONTAMINATED ENVIRONMENTS. RJLM. 2025;33(3):251–5. doi:10.4323/rjlm.2025.251
Monteiro RAC, Pariz JR, Pieri P de C, Hallak J. An easy, reproducible and cost-effective method for andrologists to improve the laboratory diagnosis of non-obstructive azoospermia: a novel microcentrifugation technique. Int Braz J Urol. 2016;42(1):132–8. doi:10.1590/S1677-5538.IBJU.2015.0090 PubMed PMID: 27136479; PubMed Central PMCID: PMC4811238.
Panicker L, D’Silva F, Surve S. Effect of Ageing of Seminal Stains on Their Detection on Fabrics In Criminal Investigations. Arab Journal of Forensic Sciences & Forensic Medicine. el 14 de diciembre de 2022;4(2):89–102. Located at: We confirm that we do not have any conflict of interest related to publishing the scientific paper. doi:10.26735/NHYE4338
Simons JL, Vintiner SK. Effects of Histological Staining on the Analysis of Human DNA from Archived Slides. Journal of Forensic Sciences. 2011;56(s1):S223–8. doi:10.1111/j.1556-4029.2010.01595.x
Hendin BN, Patel B, Levin HS, Thomas AJ, Agarwal A. Identification of Spermatozoa and Round Spermatids in the Ejaculates of Men with Spermatogenic Failure. Urology. el 1 de mayo de 1998;51(5):816–9. doi:10.1016/S0090-4295(98)00007-7
Sharma RK, Gupta S, Agarwal A, Finelli R, Kuroda S, Saleh R, et al. Role of Cytocentrifugation Combined with Nuclear Fast Picroindigocarmine Staining in Detecting Cryptozoospermia in Men Diagnosed with Azoospermia. World J Mens Health. octubre de 2022;40(4):627–35. doi:10.5534/wjmh.210210 PubMed PMID: 35118836; PubMed Central PMCID: PMC9482851.
Mitchell A. Validation study of KPICS SpermFinderTM by NicheVision Forensics, LLC for the identification of human spermatozoa. J Forensic Sci. julio de 2012;57(4):1042–50. doi:10.1111/j.1556-4029.2012.02081.x PubMed PMID: 22372428.
Alger P, Conti T, Buel E. Development of an Automated System to Detect Spermatozoa on Laboratory Slides to Increase Productivity in the Analysis of Sexual Assault Cases. US Department of Justice [Internet]. 2011. Disponible en: https://www.ojp.gov/pdffiles1/nij/grants/236473.pdf
Grosjean F, Castella V. Test of the Hy-liter system for the identification of spermatozoa in sexual assault cases [Internet]. el 9 de septiembre de 2025 [citado el 1 de octubre de 2026];411–6. Disponible en: https://iris.unil.ch/handle/iris/281967
Iswara RAFW, Gizela BA, Rohmah IN, Dhanardhono T. Association between menstruation and spermatozoa persistence in sexual assault victims: a medicolegal case–control study in Southeast Sulawesi, Indonesia. Legal Medicine. el 1 de mayo de 2026;83:102856. doi:10.1016/j.legalmed.2026.102856
Oren-Benaroya R, Kipnis J, Eisenbach M. Phagocytosis of human post-capacitated spermatozoa by macrophages. Hum Reprod. noviembre de 2007;22(11):2947–55. doi:10.1093/humrep/dem273 PubMed PMID: 17766922.
Gamblin AP, Morgan-Smith RK. The characteristics of seminal fluid and the forensic tests available to identify it. WIREs Forensic Science. 2020;2(3):e1363. doi:10.1002/wfs2.1363
Sakurada K, Watanabe K, Akutsu T. Current Methods for Body Fluid Identification Related to Sexual Crime: Focusing on Saliva, Semen, and Vaginal Fluid. Diagnostics. septiembre de 2020;10(9):693. doi:10.3390/diagnostics10090693
Golomingi R, Haas C, Dobay A, Kottner S, Ebert L. Sperm hunting on optical microscope slides for forensic analysis with deep convolutional networks – a feasibility study. Forensic Science International: Genetics. el 1 de enero de 2022;56. doi:10.1016/j.fsigen.2021.102602 PubMed PMID: 34700216.
Deshmukh S, Inci F, Karaaslan MG, Ogut MG, Duncan D, Klevan L, et al. A confirmatory test for sperm in sexual assault samples using a microfluidic-integrated cell phone imaging system. Forensic Sci Int Genet. septiembre de 2020;48:102313. doi:10.1016/j.fsigen.2020.102313 PubMed PMID: 32570000.
Liu KL, Tsai LC, Lin YC, Chang YH, Huang NE, Wu FC, et al. Spermatozoa identification by the 3-plex MSRE-PCR assay: a collaborative exercise. Int J Legal Med. marzo de 2022;136(2):397–404. doi:10.1007/s00414-021-02737-2 PubMed PMID: 34718845.
Kariya Y, Sakai Y, Noda T, Takai R, Takayama T, Nagai A, et al. A novel non-antibody fluorescent dual-staining technique for sperm detection in forensic samples. Int J Legal Med. el 29 de junio de 2026. doi:10.1007/s00414-026-03895-x







