ISSN 2953-6367  
http://revistainvestigo.com  
Marzo 2026  
Vol. 7 No ,19, PP. 35-45  
https://doi.org/10.56519/e4n19z28  
EFECTO DE LA ADICIÓN DE ANTIOXIDANTES ANTE EL ESTRÉS  
OXIDATIVO DE ESPERMATOZOIDES BOVINOS  
CRIOPRESERVADOS EN LA PROVINCIA DE MORONA SANTIAGO  
EFFECT OF THE ADDITION OF ANTIOXIDANTS ON OXIDATIVE  
STRESS IN CRYOPRESERVED BOVINE SPERMATOZOA IN THE  
PROVINCE OF MORONA SANTIAGO  
Jhon Alexander Carvajal Rivadeneira1, Carlos Andrés Mancheno Herrera2  
{jhon.carvajal@espoch.edu.ec1, andres.mancheno@espoch.edu.ec2}  
Fecha de recepción: 10/02/2026  
/ Fecha de aceptación: 24/02/2026 / Fecha de publicación: 31/03/2026  
RESUMEN: La criopreservación del semen bovino es una técnica muy utilizada en la  
reproducción y el mejoramiento genético; sin embargo, el proceso de congelación y  
descongelación puede afectar a los espermatozoides debido al estrés oxidativo, lo que puede  
limitar su fertilidad. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de la adición de  
antioxidantes (ácido ascórbico y resveratrol) sobre el estrés oxidativo en espermatozoides  
bovinos criopreservados en la provincia de Morona Santiago, Ecuador. Se utilizó un diseño  
experimental completamente al azar con tres tratamientos: control, ácido ascórbico y  
resveratrol y seis repeticiones por cada uno. El semen fue colectado de un toro Simmental  
mediante vagina artificial, diluido con Triladyl, suplementado con antioxidantes (4 mg/ml) y  
criopreservado en nitrógeno líquido. Posteriormente, se evaluaron los parámetros cinéticos  
mediante el sistema CASA, la integridad de la membrana plasmática y acrosómica mediante  
tinción fluorescente (PI/PNA-FITC) y la integridad de la cromatina mediante tinción con naranja  
de acridina. Se aplicó la prueba de Tukey (p < 0,05) para la separación de medias. Los resultados  
evidenciaron que el tratamiento control presentó valores significativamente superiores en  
motilidad total (56,83%), motilidad progresiva (41,52%), velocidad media del trayecto (37,85  
µm/s) y velocidad en línea recta (28,20 µm/s), en comparación con los tratamientos con  
antioxidantes, los cuales redujeron significativamente estos parámetros. No obstante, el  
resveratrol mostró un efecto protector sobre la integridad estructural, alcanzando el mayor  
porcentaje de cromatina intacta (96,72%) y valores de integridad de membrana similares al  
control, mientras que el ácido ascórbico presentó menores porcentajes de integridad  
estructural. Se concluye que, en las condiciones evaluadas, la adición de antioxidantes no  
mejoró la cinética espermática post-criopreservación, pero el resveratrol contribuyó a  
1Maestrante del Programa de Maestría en Producción Animal – Escuela Superior Politécnica de Chimborazo (ESPOCH) – Sede  
Morona Santiago, https://orcid.org/0009-0007-9418-0266  
2Escuela Superior Politécnica de Chimborazo (ESPOCH) – Facultad de Ciencias Pecuarias, https://orcid.org/0000-0002-2682-0336  
35  
Revista Científica Multidisciplinaria InvestiGo  
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EFECTO DE LA ADICIÓN DE ANTIOXIDANTES ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO DE ESPERMATOZOIDES BOVINOS CRIOPRESERVADOS  
EN LA PROVINCIA DE MORONA SANTIAGO  
preservar la integridad de la cromatina y la membrana plasmática, lo que sugiere su potencial  
aplicación en la protección estructural del semen bovino criopreservado.  
Palabras clave: criopreservación, semen bovino, estrés oxidativo, antioxidantes, resveratrol,  
ácido ascórbico  
ABSTRACT: Cryopreservation of bovine semen is a widely used technique in reproduction  
and genetic improvement; however, the freezing and thawing process can affect sperm due to  
oxidative stress, which can limit their fertility. The objective of this study was to evaluate the  
effect of adding antioxidants (ascorbic acid and resveratrol) on oxidative stress in  
cryopreserved bovine spermatozoa in the province of Morona Santiago, Ecuador. A completely  
randomized experimental design with three treatments: control, ascorbic acid, and resveratrol  
were used, with six replicates per treatment. Semen was collected from a Simmental bull using  
an artificial vagina, diluted with Triladyl, supplemented with antioxidants (4 mg/ml), and  
cryopreserved in liquid nitrogen. Subsequently, kinetic parameters were evaluated using the  
CASA system, plasma and acrosomal membrane integrity was assessed using fluorescent  
staining (PI/PNA-FITC), and chromatin integrity was assessed using acridine orange staining.  
Tukey's test (p < 0.05) was used for mean separation. The results showed that the control  
treatment exhibited significantly higher values for total motility (56.83%), progressive motility  
(41.52%), mean travel speed (37.85 µm/s), and straight-line speed (28.20 µm/s) compared to  
the antioxidant treatments, which significantly reduced these parameters. However,  
resveratrol showed a protective effect on structural integrity, achieving the highest percentage  
of intact chromatin (96.72%) and membrane integrity values similar to the control, while  
ascorbic acid showed lower percentages of structural integrity. It is concluded that, under the  
evaluated conditions, the addition of antioxidants did not improve sperm kinetics post-  
cryopreservation, but resveratrol contributed to preserving chromatin and plasma membrane  
integrity, suggesting its potential application in the structural protection of cryopreserved  
bovine semen.  
Keywords: cryopreservation, bovine semen, oxidative stress, antioxidants, resveratrol, ascorbic  
acid  
INTRODUCCIÓN  
La criopreservación de semen bovino es una técnica fundamental en los programas de  
mejoramiento genético y reproducción asistida del ganado, esta tecnología permite conservar  
material genético de toros con características deseables por tiempo indefinido, facilitando su uso  
en diferentes regiones y épocas del año, sin embargo, el proceso de congelación y descongelación  
genera daños celulares importantes que afectan la calidad espermática y, por ende, las tasas de  
fertilidad en la inseminación artificial (1).  
Durante la criopreservación, los espermatozoides experimentan estrés oxidativo debido a la  
formación excesiva de especies reactivas de oxígeno (ROS), estas moléculas atacan componentes  
celulares vitales como la membrana plasmática, las mitocondrias y el ADN espermático,  
36  
EFECTO DE LA ADICIÓN DE ANTIOXIDANTES ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO DE ESPERMATOZOIDES BOVINOS CRIOPRESERVADOS  
EN LA PROVINCIA DE MORONA SANTIAGO  
comprometiendo la motilidad, viabilidad y capacidad fecundante de las células. (2). El problema  
se agrava porque los espermatozoides tienen defensas antioxidantes limitadas y un citoplasma  
reducido, lo que los hace especialmente vulnerables al daño oxidativo (3). Esta situación  
representa un desafío técnico y económico para los productores ganaderos, ya que las dosis  
seminales de baja calidad reducen la eficiencia reproductiva y aumentan los costos operativos.  
En la provincia de Morona Santiago, la ganadería representa una actividad económica importante  
para las familias rurales, la región cuenta con condiciones climáticas particulares, con  
precipitaciones anuales de 2500 mm y altitudes que varían desde los 200 hasta los 5200 metros  
sobre el nivel del mar (4). Estas características ambientales pueden influir en la fisiología  
reproductiva del ganado local. Sin embargo, existe poca información sobre el comportamiento  
del semen bovino criopreservado bajo estas condiciones específicas, lo que limita la optimización  
de los protocolos de conservación seminal adaptados a la realidad productiva de la zona.  
La literatura científica ha demostrado que la adición de antioxidantes al medio de  
criopreservación puede reducir el daño oxidativo y mejorar la calidad del semen descongelado.  
Entre los antioxidantes más estudiados se encuentran el ácido ascórbico (vitamina C) y el  
resveratrol, ambos con mecanismos de acción complementarios, el ácido ascórbico actúa como  
un potente captador de radicales libres y protege la integridad de la membrana espermática (5).  
A pesar de los avances en el conocimiento sobre antioxidantes en la criopreservación seminal,  
aún existen vacíos importantes. No se ha establecido con claridad cuál antioxidante ofrece  
mejores resultados en términos de relación costo-beneficio para condiciones específicas de cada  
región.  
La presente investigación surge de la necesidad de generar información aplicada que permita  
mejorar la eficiencia de los programas de inseminación artificial en la provincia de Morona  
Santiago. La comparación directa entre ácido ascórbico y resveratrol, bajo las mismas condiciones  
experimentales, permitirá identificar la alternativa más efectiva para proteger la calidad  
espermática durante la criopreservación. Esta información es especialmente valiosa  
considerando las condiciones particulares de la región y la necesidad de optimizar recursos en los  
sistemas de producción ganadera.  
Por lo anterior, el objetivo general de este estudio fue evaluar el efecto de la adición de  
antioxidantes ante el estrés oxidativo de espermatozoides bovinos criopreservados en la  
provincia de Morona Santiago. De manera específica, se busca identificar el efecto antioxidante  
del ácido ascórbico y resveratrol sobre los parámetros cinéticos de espermatozoides bovinos  
criopreservados y analizar los cambios en la integridad de la membrana e integridad de la  
cromatina (ADN) frente a la adición de estos antioxidantes en el medio de congelación. Se planteó  
como hipótesis que la adición de antioxidantes al medio de criopreservación reducirá  
significativamente el estrés oxidativo y mejorará la viabilidad y motilidad de los espermatozoides  
bovinos criopreservados.  
37  
EFECTO DE LA ADICIÓN DE ANTIOXIDANTES ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO DE ESPERMATOZOIDES BOVINOS CRIOPRESERVADOS  
EN LA PROVINCIA DE MORONA SANTIAGO  
MATERIALES Y MÉTODOS  
El trabajo se llevó a cabo en la Ganadería Simmental & Charolais Hermanos Carvajal, localizada  
en la parroquia San Isidro, cantón Morona, provincia de Morona Santiago, Ecuador. La zona se  
caracteriza por presentar un clima tropical húmedo, con precipitaciones anuales promedio de  
2500 mm y temperaturas que oscilan entre 18 y 28 °C. La finca se encuentra a 1200 metros sobre  
el nivel del mar, en coordenadas geográficas aproximadas X: 822430, Y: 9745553. Todas las  
actividades de procesamiento, conservación y análisis seminal se realizaron bajo condiciones  
controladas de laboratorio, garantizando la bioseguridad, trazabilidad y la integridad de las  
muestras durante todo el proceso experimental.  
La muestra seminal se obtuvo de un toro Simmental de 5 años, que se encontraba sano y en  
buenas condiciones reproductivas. El animal se mantenía en pastoreo a voluntad, en una pradera  
de gramalote morado (Axonopus scoparius) con acceso constante a agua fresca, balanceado y  
sales minerales, lo que le permitía mantener una buena condición corporal de 3,5 al momento de  
la colecta del semen. El eyaculado se colectó mediante vagina artificial siguiendo protocolos  
estandarizados de higiene y bioseguridad. Cada muestra aceptada se dividió en alícuotas  
equitativas y fue diluida con el diluyente comercial Triladyl según las recomendaciones del  
fabricante. Una vez realizada la dilución final se incorporaron los antioxidantes (4 mg/ml de  
semen diluído) obteniendo así un tratamiento control (sin antioxidantes) y 2 tratamientos  
experimentales (Ácido ascórbico y resveratrol). Las muestras fueron empajilladas en pajillas de  
0,5 cc con una concentración aproximada de 40 millones de espermatozoides por dosis. Se  
refrigeraron a 4o C durante 20 minutos para posteriormente ser congeladas en vapores de  
nitrógeno durante 20 minutos a 4 cm del nitrógeno líquido. Finalmente fueron sumergidas en  
nitrógeno líquido para ser colocadas en el tanque hasta su análisis.  
El estudio se desarrolló bajo un diseño experimental completamente al azar (DCA), el diseño  
contempló un total de 18 unidades experimentales (pajuelas) evaluadas al final del estudio  
divididas en 6 pajuelas por tratamiento. Se aplicó la prueba de separación de medias de Tukey (p  
< 0.05) para identificar los tratamientos estadísticamente diferentes entre sí.  
Los parámetros cinemáticos del esperma de cada tratamiento, se evaluaron objetivamente  
utilizando un sistema CASA. (Sperm Class Analyzer, SCA-Evolution® 2020, v.6.4.0.99 soft-ware.  
Microptic S.L., Barcelona, España), acoplado a un microscopio de contraste de fase (Nikon Eclipse  
modelo 50i; con capacidad de contraste negativo [Ph1] con filtro verde) con los siguientes ajustes:  
25 fotogramas/s, área de la cabeza 5-70 μm2, límite de velocidad para espermatozoides lentos  
10 μm/s, límite de velocidad para espermatozoides medios 25 μm/s, límite de velocidad para  
espermatozoides rápidos 70 μm/s y rectitud mínima para espermatozoides progresivos 70 % [13].  
Se evaluaron un mínimo de tres campos y 600 trayectorias de espermatozoides con un aumento  
de 100×. Se analizaron los siguientes parámetros: motilidad total de los espermatozoides (TM,  
%), motilidad progresiva de los espermatozoides (PSM, %), velocidad curvilínea (VCL, μm/s),  
velocidad media de recorrido (VAP, μm/s), velocidad en línea recta (VSL, μm/s), rectitud (STR, %),  
linealidad (LIN, %), oscilación (WOB, %), amplitud de desplazamiento lateral de la cabeza (ALH,  
μm) y frecuencia de cruce de latidos (BCF, Hz).  
38  
EFECTO DE LA ADICIÓN DE ANTIOXIDANTES ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO DE ESPERMATOZOIDES BOVINOS CRIOPRESERVADOS  
EN LA PROVINCIA DE MORONA SANTIAGO  
La viabilidad espermática (integridad de la membrana plasmática, %) y la integridad acrosómica  
(%) se determinaron utilizando una combinación de sondas fluorescentes: yoduro de propidio (PI,  
Sigma P4170) y aglutinina de cacahuete conjugada con cianato isotiocianato conjugado con  
aglutinina de cacahuete (Arachis hypogaea) (PNA-FITC, Sigma L7381) [13,24]. Se examinaron un  
total de 200 espermatozoides por portaobjetos utilizando un microscopio óptico epifluorescente  
Nikon Eclipse E200 (Nikon Instruments Inc., Nueva York, NY, EE. UU.) con un filtro de triple banda  
(aumento de 400× con una excitación de 330-380 nm y una emisión de (aumento de 400× con  
una excitación: 330-380 nm, y emisión: 420 nm). Se distinguieron cuatro subpoblaciones  
diferentes de espermatozoides: (1) membrana plasmática intacta/acrosoma intacto (IPIA (2)  
membrana  
plasmática  
intacta/acrosoma  
dañado  
(IPDA  
(3)  
membrana  
plasmática  
dañada/acrosoma intacto (DPIA-); y (4) membrana plasmática dañada/acrosoma dañado (DPDA).  
La fragmentación del ADN (indicativa de cromatina condensada o inestable) se evaluó mediante  
tinción con naranja de acridina. Las muestras de esperma descongeladas de cada tratamiento  
experimental se extendieron en un portaobjetos, se secaron al aire y se fijaron durante la noche  
en solución de Carnoy (metanol y ácido acético en una proporción de 3:1). Los frotis se secaron  
al aire y se incubaron en solución tampón (80 mM, ácido cítrico y 15 mM Na2HPO4; pH 2,5) a 75  
◦C durante 5 minutos para comprobar la estabilidad de la cromatina. Posteriormente, los  
portaobjetos se tiñeron con solución de clorhidrato de naranja de acridina (A8097, Sigma Aldrich  
Co., 0,2 mg/mL) durante 5 minutos y se lavaron con agua para eliminar la tinción de fondo.  
Inmediatamente, mientras aún estaban húmedos, se realizó la evaluación con un microscopio de  
epifluorescencia [ (modelo Eclipse Ci. L 100-240 V, Nikon, Tokio, Japón) , y equipado con una  
cámara de alta resolución (Mshot Image Analysis System, versión V1.1.3) (aumento de 600×,  
excitación: 510-560 nm y emisión de 590 nm). Se examinaron al menos 200 espermatozoides de  
al menos diez campos aleatorios por portaobjetos. Se identificaron dos categorías de  
fluorescencia: 1) los espermatozoides teñidos de verde se consideraron con cromatina normal; y  
2) los espermatozoides teñidos de amarillo verdoso a rojo se consideraron con cromatina dañada.  
RESULTADOS  
Efecto de la adición de antioxidantes ante el estrés oxidativo de espermatozoides bovinos  
criopreservados  
Con el fin de evaluar el efecto de la adición de antioxidantes sobre la calidad seminal posterior al  
proceso de criopreservación, se analizaron los principales parámetros espermáticos post-  
descongelación en los diferentes tratamientos experimentales: grupo control, ácido ascórbico y  
resveratrol.  
Tabla 2. Efecto de los antioxidantes sobre los parámetros seminales post-descongelación.  
Control  
AAscorbico  
Resveratrol  
VARIABLES  
Prob.  
MEDIA  
39  
EFECTO DE LA ADICIÓN DE ANTIOXIDANTES ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO DE ESPERMATOZOIDES BOVINOS CRIOPRESERVADOS  
EN LA PROVINCIA DE MORONA SANTIAGO  
MT (%)  
MP (%)  
56.83  
41.52  
20.85  
63.36  
37.85  
28.20  
72.82  
46.39  
61.29  
2.71  
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
B
B
A
B
55.52  
26.27  
11.87  
39.77  
24.06  
17.89  
66.55  
41.53  
59.20  
1.88  
A
B
B
B
B
B
B
A
A
B
B
B
A
A
A
A
A
46.98  
21.88  
8.59  
B
B
0.0024  
<0.0001  
<0.0001  
<0.0001  
<0.0001  
<0.0001  
0.0017  
0.0744  
0.3599  
0.0001  
<0.0001  
0.0017  
0.8095  
0.0479  
0.0024  
0.3836  
0.0035  
**  
**  
**  
**  
**  
**  
**  
NS  
NS  
**  
**  
**  
NS  
*
MRP (%)  
C
VCL (µm/s)  
VAP (µm/s)  
VSL (µm/s)  
STR (%)  
39.66  
23.18  
16.68  
65.69  
39.90  
58.03  
1.96  
B
B
B
B
LIN (%)  
A
A
B
WOB (%)  
ALH (µm)  
BCF (Hz)  
9.76  
6.52  
6.18  
B
IPIA (%)  
59.00  
0.83  
48.50  
0.67  
58.83  
0.50  
A
A
AB  
B
IPDA (%)  
DPIA (%)  
12.50  
27.67  
308.00  
10.83  
16.17  
34.67  
324.83  
24.00  
15.00  
25.67  
280.83  
9.00  
DPDA (%)  
Sperm crom. Intac.  
Sperm crom. Frag.  
**  
NS  
**  
A
B
Total, Sperm. contados en  
doce campos  
318.83  
A
348.83  
A
289.83  
A
0.1880  
NS  
% Sperm crom. Intac.  
% Sperm crom. Frag.  
96.31  
3.70  
A
A
93.07  
6.93  
A
A
96.72  
3.29  
A
A
0.0397  
0.0397  
*
*
Nota: *MT: motilidad total; *MP: motilidad progresiva; *MRP: motilidad rápida progresiva; *VCL: velocidad  
curvilínea; *VAP: velocidad media del trayecto; *VSL: velocidad en línea recta; *STR: rectitud del movimiento  
espermático; *LIN: linealidad del movimiento; *WOB: oscilación del movimiento; *ALH: amplitud lateral de la cabeza;  
*BCF: frecuencia de batido flagelar; *IPIA (%): integridad de la membrana plasmática; *IPDA (%): integridad del ADN  
espermático; *DPIA (%): daño de la membrana plasmática; *DPDA (%): daño del ADN espermático; *Sperm crom.  
Intac.: espermatozoides con cromatina intacta; *Sperm crom. Frag.: espermatozoides con cromatina fragmentada;  
*Total Sperm. contados en doce campos: número total de espermatozoides evaluados en doce campos microscópicos;  
*Prob: Probabilidad; *>0,05: no es significativo; * <0,05: es significativo; *Sig: Significancia.  
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EFECTO DE LA ADICIÓN DE ANTIOXIDANTES ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO DE ESPERMATOZOIDES BOVINOS CRIOPRESERVADOS  
EN LA PROVINCIA DE MORONA SANTIAGO  
La motilidad total (MT) evidenció diferencias estadísticas significativas (P<0,05) entre  
tratamientos, donde el control (56,83%) y el ácido ascórbico (55,52%) mantuvieron valores  
similares, mientras que el resveratrol presentó una media inferior de 46,98%. En cuanto a la  
motilidad progresiva (MP), se observó diferencias estadísticas significativas (P<0,05), con el  
control registrando 41,52%, seguido del ácido ascórbico con 26,27% y el resveratrol con 21,88%.  
En cuanto a los parámetros de velocidad, la velocidad curvilínea (VCL) fue mayor en el control  
(63,36 µm/s), mientras que el ácido ascórbico (39,77 µm/s) y el resveratrol (39,66 µm/s)  
presentaron valores inferiores (P<0,05). De forma similar, tanto la velocidad media del trayecto  
(VAP) como la velocidad en línea recta (VSL) fueron superiores en el grupo control (37,85 y 28,20  
µm/s, respectivamente) (P<0,05).  
La linealidad (LIN) no mostró diferencias estadísticas significativas entre tratamientos (P>0,05).  
Sin embargo, la amplitud de desplazamiento lateral de la cabeza (ALH) presentó diferencias  
significativas (P<0,05), con el valor más alto en el control (2,71 µm), en comparación con el ácido  
ascórbico (1,88 µm) y el resveratrol (1,96 µm).  
En la evaluación de la integridad de membrana plasmática (IPIA), se observaron diferencias  
significativas (P<0,05), donde el control (59,00%) y el resveratrol (58,83%) mostraron valores  
superiores al ácido ascórbico (48,50%).  
Por otro lado, el porcentaje de espermatozoides con cromatina intacta presentó diferencias  
significativas (P<0,05), alcanzando el valor más alto en el resveratrol (96,72%), seguido del control  
(96,31%) y del ácido ascórbico (93,07%). En contraste, la integridad del ADN evaluada como IPDA  
no mostró diferencias estadísticas entre tratamientos (P>0,05).  
La Figura 1 presenta la comparación de la concentración espermática entre los tres tratamientos  
evaluados. El tratamiento con resveratrol mostró una concentración de 45,75 millones, el  
tratamiento con acido ascórbico de 45,30 millones y el tratamiento control de 44,80 millones.  
Concentración espermática (millones de  
espermatozoides/muestra)  
RESVERATROL  
ÁCIDO ASCÓRBICO  
CONTROL  
45,75  
45,3  
44,8  
44,2 44,4 44,6 44,8  
45  
45,2 45,4 45,6 45,8  
46  
Figura 1. Efecto de diferentes tratamientos sobre la concentración espermática.  
Fuente: Elaboración propia.  
41  
EFECTO DE LA ADICIÓN DE ANTIOXIDANTES ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO DE ESPERMATOZOIDES BOVINOS CRIOPRESERVADOS  
EN LA PROVINCIA DE MORONA SANTIAGO  
DISCUSIÓN  
La motilidad total es uno de los parámetros más sensibles al daño oxidativo inducido por la  
criopreservación (6). (7) reportan que la suplementación con resveratrol en semen bovino  
criopreservado mejora la motilidad total hasta 61,9 ± 4,0%, comparado con 55,8 ± 3,8% en el  
grupo control (P<0,05), lo que demuestra un efecto positivo cuando se utiliza en dosis adecuadas.  
Sin embargo, (8) observaron resultados contrastantes, ya que concentraciones de 10–50 µM de  
resveratrol redujeron la motilidad total post-descongelación en semen bovino.  
La motilidad progresiva refleja la capacidad real de desplazamiento de los espermatozoides hacia  
el ovocito y depende de la integridad mitocondrial y del axonema (9). (7) reportan una motilidad  
progresiva de 37 ± 8,8% con resveratrol, frente a 33,3 ± 3,74% en el control (P<0,05). Este hallazgo  
resulta relevante dado que los estudios sobre estrés oxidativo en semen criopreservado  
demuestran que la motilidad progresiva es uno de los parámetros más vulnerables al daño  
mitocondrial inducido por especies reactivas de oxígeno (10). En este contexto, (11) explica que  
la reducción de fertilidad asociada al semen congelado está directamente vinculada con  
alteraciones en la movilidad progresiva y el metabolismo energético, lo que subraya la  
importancia de proteger este parámetro durante la criopreservación.  
Los parámetros cinéticos de velocidad media del trayecto (VAP) y velocidad en línea recta (VSL)  
son indicadores de la eficiencia de desplazamiento espermático (12). (13) destaca que estos  
valores de velocidad están estrechamente asociados a la funcionalidad mitocondrial y a la  
integridad del flagelo en semen criopreservado bovino. En su estudio experimental, (2) evaluaron  
la suplementación con resveratrol en medios de criopreservación de semen bovino y reportaron  
que, tras la descongelación, los valores de VAP se mantienen alrededor de 40–35 µm/s y los de  
VSL en rangos de 28–26 µm/s, sin evidenciar diferencias estadísticas significativas al antioxidante  
dentro del mismo protocolo de congelación. Sin embargo, (8) reportan una disminución de estos  
parámetros cinéticos a concentraciones mayores de resveratrol, lo que confirma que su efecto es  
dependiente de la dosis y del contexto del diluyente utilizado.  
La integridad de membrana es esencial para la viabilidad espermática y el proceso de fertilización  
(14). (15) evaluó la integridad de membrana mediante la prueba HOST y su relación con el factor  
racial, sin encontrar diferencias estadísticamente significativas, observándose únicamente  
variaciones numéricas entre grupos. En su estudio, las razas Jersey y Holstein presentaron los  
mayores porcentajes de integridad de membrana (87,40 y 87,30 ± 3,01%, respectivamente),  
mientras que la raza Brown Swiss registró el valor más bajo (83,67 ± 3,01%).  
La estabilidad de la cromatina es fundamental para el desarrollo embrionario (16). En este  
contexto, (5) demuestran que antioxidantes como el resveratrol y la vitamina C reducen  
significativamente el daño del ADN inducido por la criopreservación en semen. De manera similar,  
(17) reportan una reducción del daño nuclear en semen bovino suplementado con antioxidantes  
en comparación con el grupo control. Estos hallazgos sugieren que la protección antioxidante  
durante la criopreservación puede preservar la integridad genética espermática, lo cual es  
determinante para la fertilidad y el desarrollo embrionario posterior.  
42  
EFECTO DE LA ADICIÓN DE ANTIOXIDANTES ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO DE ESPERMATOZOIDES BOVINOS CRIOPRESERVADOS  
EN LA PROVINCIA DE MORONA SANTIAGO  
Por su parte, (18) reportan que la integridad del ADN espermático (IPDA) tiende a mantenerse  
relativamente estable durante la congelación, aunque puede verse afectada bajo condiciones de  
mayor estrés celular. De manera concordante, (19) asocian el daño del ADN espermático con  
incrementos de estrés oxidativo severo. Sin embargo, esta condición no se evidenció de forma  
marcada en el presente estudio, lo que sugiere una adecuada protección del material genético  
espermático durante el periodo de evaluación.  
La concentración espermática es un parámetro fundamental en la evaluación de la calidad  
seminal. (20) menciona que la concentración espermática normal en bovinos oscila entre 800-  
1200 millones de espermatozoides por mililitro (ml), es decir, 0,8-1,2 millones por mm³.  
CONCLUSIONES  
Los antioxidantes ácido ascórbico y resveratrol no mejoraron el movimiento de los  
espermatozoides bovinos después de la descongelación. El grupo control obtuvo mejores  
resultados en todos los parámetros de movimiento: motilidad total (56,83%), motilidad  
progresiva (41,52%), velocidad media del trayecto (37,85 μm/s) y velocidad en línea recta (28,20  
μm/s). Ambos antioxidantes disminuyeron estos valores de forma significativa. Esto indica que,  
en las condiciones de este estudio, agregar antioxidantes al medio de congelación afectó  
negativamente la capacidad de movimiento de los espermatozoides.  
En relación con la integridad estructural, el resveratrol fue el antioxidante más efectivo para  
proteger la estructura del espermatozoide. Logró mantener la integridad de la cromatina en un  
96,72% de los espermatozoides, superando al control (96,31%) y al ácido ascórbico (93,07%). En  
cuanto a la integridad de la membrana, el resveratrol (58,83%) alcanzó valores similares al control  
(59,00%), mientras que el ácido ascórbico fue menor (48,50%). El ADN espermático se mantuvo  
bien protegido en todos los tratamientos sin diferencias importantes. Por lo tanto, el resveratrol  
demostró ser eficaz para proteger la cromatina y la membrana de los espermatozoides durante  
la congelación  
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