ISSN 2953-6367
Marzo 2025
http://revistainvestigo.com
Vol. 6, No. 15, PP. 82-96
https://doi.org/10.56519/d5n4ek44
Revista Científica Multidisciplinaria InvestiGo
Riobamba – Ecuador
Cel: +593 97 911 9620
revisinvestigo@gmail.com
82
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA
TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA BAJO
CONDICIONES IN VITRO
BIOCIDAL EFFECT OF TOBACCO (NICOTIANA TABACUM)
EXTRACT APPLIED TO PHYTOPHTHORA PALMIVORA UNDER IN
VITRO CONDITIONS
Christian Chicaiza
1
, Heidy Llore
2
, Xavier Carrera
3
, Bernardo Castro
4
, Andrea Rivera
5
.
{christian.chicaiza3604@utc.edu.ec
1
, heidy.llore4712@utc.edu.ec
2
, washington.carrrera3625@utc.edu.ec
3
,
bernardo.castro@3acomposites.com
4
, evelyn.rivera6209@utc. edu.ec
5
}
Fecha de recepción: 20/01/2025 / Fecha de aceptación: 24/01/2025 / Fecha de publicación: 03/03/2025
RESUMEN: La Phytophthora palmivora es un oomiceto hemiotrófico que afecta
plantaciones de Balsa (Ochroma pyramidale), el control de esta enfermedad se la realiza con
la aplicación de cal en el área afectada o con la eliminación de los árboles que tienen
avanzados rasgos de infección. El objetivo de esta investigación es evaluar los efectos del
extracto etanólico de tabaco (Nicotiana tabacum) sobre el crecimiento micelial y la movilidad
de zoosporas a nivel in vitro. Para ello se emplearon metodologías cualitativas y cuantitativas,
aplicando cuatro tratamientos con diferentes concentraciones del extracto etanólico de
tabaco, donde se analizó las propiedades fisicoquímicas del material precursor, cambios
macroscópicos y microscópicos de P. palmivora; los datos obtenidos se analizaron utilizando
InfoStat versión 2020 mediante ANOVA con un nivel de confianza del 95%. Los resultados
reflejaron que el tratamiento N1C3E1 presentó disminución de micelio en comparación al
resto de tratamientos, además de una reducción significativa en el crecimiento radial en el
transcurso de 11 días de evaluación, inhibiendo un 11,44% de su crecimiento. El plaqueo de
los tratamientos abordo que N1C3E1 obtuvo un valor de 5 en la producción de clamidosporas.
En cuanto al efecto del extracto en las zoosporas a las 32 horas del estudio, demostró que
N1C3E1 posee una leve movilidad, mientras que el resto de los tratamientos presentaron una
1
Estudiante investigador, Universidad Técnica de Cotopaxi, La Maná-Ecuador, https://orcid.org/0000-0001-8382-2883; +593 99
988 3558.
2
Estudiante investigador, Universidad Técnica de Cotopaxi, La Maná-Ecuador, https://orcid.org/0000-0002-3059-7886; +593 99
9688 504.
3
Docente Tutor de la carrera de Agroindustria, Universidad Técnica de Cotopaxi, La Maná-Ecuador, https://orcid.org/0000-0002-
9237-7563; +593 99 595 5402.
4
Investigador del área de Tecnología y Desarrollo Silvícola, Plantaciones de Balsa PLANTABAL S.A, Quevedo-Ecuador,
https://orcid.org/0000-0002-1829-6052; +593 98 865 4888.
5
Docente Tutor de la carrera de Agroindustria, Universidad Técnica de Cotopaxi, La Maná-Ecuador, https://orcid.org/0000-0002-
5580-8467.
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA
BAJO CONDICIONES IN VITRO
83
actividad moderada. Por lo tanto, se concluye que el tratamiento con la mayor concentración
afecta el desarrollo y aspecto morfológico de la colonia de P. palmivora, debido a la presencia
de nicotina en los medios de cultivo modificados.
Palabras Clave: Inhibir, micelio, clamidosporas, zoosporas, nicotina, morfológico
ABSTRACT: Phytophthora palmivora is a hemiotrophic oomycete that affects plantations of
Balsa (Ochroma pyramidale), the control of this disease is carried out with the application of
lime in the affected area or with the elimination of the trees that have advanced infection
traits. The objective of this research is to evaluate the effects of ethanolic extract of tobacco
(Nicotiana tabacum) on mycelial growth and zoospore mobility at the in vitro level. For this
purpose, qualitative and quantitative methodologies were used, applying four treatments
with different concentrations of tobacco ethanolic extract, where the physicochemical
properties of the precursor material, macroscopic and microscopic changes of P. palmivora
were analyzed; the data obtained were analyzed using InfoStat version 2020 by means of
ANOVA with a confidence level of 95%. The results showed that treatment N1C3E1 presented
a decrease in mycelium compared to the rest of the treatments, in addition to a significant
reduction in radial growth over the course of 11 days of evaluation, inhibiting 11.44% of its
growth. The plating of the treatments showed that N1C3E1 obtained a value of 5 in the
production of chlamydospores. As for the effect of the extract on zoospores at 32 hours of the
study, it showed that N1C3E1 has a slight mobility, while the rest of the treatments presented
a moderate activity. Therefore, it is concluded that the treatment with the highest
concentration affects the development and morphological aspect of the colony of P.
palmivora, due to the presence of nicotine in the modified culture media.
Keywords: Inhibit, mycelium, chlamydospores, zoospores, nicotine, morphological
INTRODUCCIÓN
Esta investigación propone una solución innovadora para el control de P. palmivora in vitro,
mediante la aplicación del extracto etanólico de tabaco obtenido a partir de residuos como
“hojas no conformes”.
A nivel mundial la balsa (Ochroma piramidal) es conocida por su resistencia, ligereza y
estabilidad; estos árboles de la fauna nativa tropical Americana pueden llegar a medir 20 m de
altura y 75 cm de diámetro en un periodo de tiempo de 5-8 años (1), donde la mayor parte de
madera de balsa comercializada es obtenida de Ecuador, ya que cuenta con las condiciones
climáticas ideales para la plantación y producción de balsa, este cultivo ocupa alrededor de 17-
30 metros cúbicos por hectárea al año (2). La balsa al ser una de las maderas más ligeras (3) es
apreciada en la industria e ingeniería como material básico para la fabricación de turbinas
eólicas e incluso puentes para vehículos.
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA
BAJO CONDICIONES IN VITRO
84
Sin embargo, el cultivo de balsa se ve afectado por P. palmivora, también conocida como pata
roja, esta se caracteriza por la decoloración rojiza en el tronco, ramas y raíces de la planta, los
árboles afectados presentan debilidad (hojas amarillentas, caída prematura y marchitamiento
de estas) (4). La infección por P. palmivora se debe al contacto o salpicadura del agua por acción
de la lluvia, donde los esporangios caducos o las zoosporas móviles se adhieren a la superficie
de la planta iniciando así el ciclo de infección (5).
Frente a esta problemática los extractos derivados de plantas surgen como una alternativa
prometedora para el manejo integrado de plagas y enfermedades (MIPE), pues son sencillos de
preparar, aplicar y exhiben una baja toxicidad en los animales en comparación a los plaguicidas
convencionales (6) , pues tienen un impacto negativo en los agroecosistemas y salud pública,
dando crédito al desarrollo de productos derivados de plantas para el control ecológico (7).
En más de 124 países se cultiva tabaco, siendo el cultivo no alimentario más grande, ocupando
3.2 millones de hectáreas de suelo fértil, donde Brasil, China y la India representan más del 55%
de la producción mundial de tabaco (8) , donde la industria tabacalera desempeña un papel
importante en el mercado (9) que a su vez genera gran volumen de residuos como subproducto
(10) , los desechos en su mayoría son hojas no conformes y la picadura descartada de la
plantación y producción, generando una grave contaminación ambiental (11) , más del 20 %
representa la materia desechada, estos no se pueden eliminar por métodos convencionales (12)
debido a su alto contenido de nicotina y carbono orgánico total; siendo a su vez un gran
desperdicio de compuestos bioactivos con propiedades antioxidantes, antiinflamatorias y
antifúngicas.
El tabaco o Nicotiana tabacum, puede alcanzar una altura entre 1 y 3 metros (13) , previas
investigaciones han demostrado el potencial de esta especie para el desarrollo de biocidas (14),
siendo así una planta ideal para el análisis biológico (15)
Los biocidas son sustancias de origen natural elaboradas a partir de extractos vegetales, los
cuales pueden llegar a tener características insecticidas, fungicidas; siendo aprovechados en el
manejo integral de plagas y enfermedades. Los extractos de Nicotiana tabacum presentan altas
concentraciones de alcaloides (16) , siendo efectivos sobre el control de plagas, debido a su
contenido en nicotina y otras sustancias como: ácidos fenólicos, cumarinas, flavonoides y
terpenoides (17) , es por ello que el objetivo de la presente investigación se enfoca en evaluar
las causas-consecuencias del extracto aplicado en el crecimiento micelial y la actividad de
zoosporas de P.palmivora, buscando neutralizar, reducir o impedir el desarrollo de este
microorganismo no deseado (18).
MATERIALES Y MÉTODOS
La presente investigación de carácter experimental, con metodología cuantitativa y cualitativa
muestra la mezcla coloidal entre el extracto etanólico de tabaco y el medio V8, formulando
diferentes concentraciones, con la finalidad de evaluar el efecto que tiene sobre el cultivo de P.
palmivora. Para ello se empleó técnicas y protocolos que se detallan a continuación:
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA
BAJO CONDICIONES IN VITRO
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Preparación del extracto etanólico de tabaco
Se recolectaron residuos de Nicotiana tabacum hojas no conformes “picadas por insectos, daño
mecánico, quebradas por cambios de temperatura repentinos” del bloque experimental la
playita del departamento de Agronomía de la Universidad Técnica de Cotopaxi Extensión la
mana (UTC Extensión La Maná, Ecuador, 0°56'49.0"S, 79°14'12.1"W).
La preparación del extracto se basó en la metodología detallada por Fragoso et al. (6), donde el
material vegetal fue enjuagado con agua destilada estéril, para luego colocarlo en un horno de
convección mecánica (o aire forzado) a 60° C durante 72 h. Inmediatamente, el material seco se
redujo a polvo usando un molino.
Se remojaron aproximadamente 100 g del polvo vegetal en un recipiente ámbar cerrado en
conjunto con etanol al 96 %, para macerar el material durante 7 días, agitándolo de vez en
cuando. La solución se filtró con un tamiz de 0,1 mm para estandarizar las partículas.
Finalmente, la substancia obtenida fue concentrada en un evaporador rotatorio a 50 °C y 55
rpm hasta su desecamiento, la muestra obtenida se almaceno a una temperatura de 4 °C.
Análisis fisicoquímico
Los análisis realizados a la muestra vegetal fueron: la humedad presente en la muestra usando
la termobalanza y siguiendo la metodología mencionada en la NMX-F-428-1982 (19); las cenizas
presentes en la muestra se obtuvieron mediante el procedimiento de la AOAC 923.03 (20) ;
mientras que para el extracto etanólico de Nicotiana tabacum se consideraron los siguientes
parámetros: el pH de la muestra, el cual se midió empleando el método de la AOAC Official
Method 981.12 pH of Acidified Foods (21) . En el contenido de alcaloides, se determinó la
nicotina por medio del espectrofotómetro BIOBASE BK-S360 con una de onda de 508 nm,
siguiendo el método presentado por Veda et al. (22) , donde se ocupó una solución madre
estándar de nicotina preparada con metanol y agua destilada. Se preparó ocho soluciones
estándar de nicotina mediante dilución de una solución de nicotina concentrada (1000 mg/L)
utilizando una concentración en el rango 0,2 – 1,6 mg/L.
Patógeno
Se utilizaron aislados de P. palmivora de la colección del Laboratorio de investigación del área
de MIPE de la empresa Plantabal. Los aislados se trasladaron a cajas Petri con contenido de jugo
V8 y se mantuvieron en una cámara de flujo laminar durante 2 semanas.
Efecto biocida del extracto sobre el crecimiento micelial de P. palmivora
P. palmivora se cultivó en V8 (163 ml de jugo V8, 1,63 g de CaCO
3
, 12,0 g de bactoagar) en cajas
Petri de 9 cm durante dos semanas, los tapones (7mm de diámetro) se tomaron de la colonia en
crecimiento activo, colocándolas en la zona central de la caja con ±10 ml de V8, modificado con
el extracto de prueba en diferentes concentraciones (ppm). Se agregaron las diferentes
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BAJO CONDICIONES IN VITRO
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concentraciones al medio V8, incluyendo un conjunto de cajas con V8 sin el extracto de tabaco
como control, como se detalla en la Tabla 1.
Tabla 1. Concentraciones para preparar los medios de cultivo.
CONCENTRACIONES
0 ppm
4000 ppm
6000 ppm
8000 ppm
Medio de cultivo
V8
250 ml
250 ml
250 ml
250 ml
Extracto vegetal Nicotiana tabacum
0 mg
1000 mg
1500 mg
2000 mg
Las placas se colocaron en la cámara de flujo, este ensayo incluyó cuatro tratamientos más el
testigo, donde cada uno tuvo tres replicas con cinco cajas, teniendo así un total de 60 cajas Petri.
Las cajas se incubaron a 25 ± 2°C por 11 días. Posteriormente se midió el diámetro de
crecimiento radial en dos direcciones perpendiculares y se promediaron. El porcentaje de
inhibición del crecimiento para cada concentración del extracto se calculó mediante la ecuación
(1) y (2):
% de Crecimiento =
Diámetro del crecimiento del hongo en el extracto (cm)
Diámetro del control negativo
(cm)
×100
(1)
% de Inhibición =100-% de crecimiento
(2)
Efecto del extracto de tabaco sobre la germinación de las zoosporas
El efecto biocida del extracto sobre la germinación de las zoosporas se realizó utilizando el
método presentado por Elliott et al. (23) , donde la producción de esporangios se inició
partiendo del micelio de dos semanas cultivado en cajas Petri con V8 (163 ml de jugo V8, 1,63 g
de CaCO
3
, 12,0 g de bactoagar). Para inducir la liberación de las zoosporas se colocó 10 ml de
agua estéril a las cajas con los esporangios, durante un periodo de tiempo de 2 horas a una
temperatura de 4 °C. Luego de la liberación de las zoosporas, el inoculo obtenido se vertió en un
vaso precipitado de 500 ml, donde se pipeteo 10 ml de cada tratamiento (4000 ppm,6000 ppm,
8000 ppm y el testigo) más 5 ml del inoculo en cajas Petri, cada tratamiento tuvo dos replicas
con cinco cajas, teniendo así un total de 40 cajas.
Análisis estadístico
Se evaluó el efecto del extracto etanólico de tabaco en concentraciones de 4000 ppm, 6000
ppm y 8000 ppm. Los datos del crecimiento micelial y producción de clamidosporas de P.
palmivora se tabularon mediante el programa InfoStat versión 2020, determinando de esta
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA
BAJO CONDICIONES IN VITRO
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manera si los tratamientos tuvieron diferencias significativas mediante prueba de Tukey con
intervalos de confianza del 95% y un análisis de varianza (ANOVA).
RESULTADOS
Caracterización fisicoquímica del material vegetal Nicotiana tabacum
Los resultados de las características fisicoquímicas de las hojas de tabaco (Nicotiana tabacum)
abordaron porcentajes de humedad del 13,57%, cenizas con un resultado del 13,86% indicando
así la presencia de minerales y compuesto inorgánicos; el valor del pH fue de 3,93 siendo este
un indicativo de acidez, tal y como se muestra en la Tabla 2.
Tabla 2. Características fisicoquímicas del material precursor.
Material vegetal
Humedad
(%)
Cenizas
(%)
pH
Nicotiana tabacum
13,57
13,86
3,93
Contenido de nicotina presente en el extracto de tabaco
El extracto de tabaco presento un contenido de nicotina del 3,19%, dicho valor de este alcaloide
se ve reflejado en la Tabla 3.
Tabla 3. Contenido de nicotina presente en el material precursor.
Parte de la planta
Longitud de
onda (nm)
Contenido De Nicotina
Técnica De Determinación
Hojas de tabaco
“
Picadas por insectos y
quebradas por cambios de
temperatura repentinos”
508 nm
3,19%
Espectrofotómetro UV/VIS BIOBASE
BK-S360
Efecto del extracto etanólico de tabaco sobre el crecimiento micelial de P. palmivora
El crecimiento de la colonia de P. palmivora se refleja en la Tabla 4, donde T0, y N1C1E1 no son
significativamente diferentes entre ellas, por otro lado, N1C1E1 y N1C2E2 presentan valores
dentro del mismo rango, el tratamiento N1C3E1 muestra una reducción significativa en el
crecimiento radial en el transcurso de 11 días de evaluación, siendo significativamente diferente
en comparación al resto tratamientos y el testigo.
Tabla 4. Tasa de crecimiento (cm/día) de P. palmivora en el testigo y los tres tratamientos con V8 más el extracto
etanólico de Nicotiana tabacum.
Tratamiento
Crecimiento radial
Crecimiento radial
Crecimiento radial
Crecimiento radial
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(cm) a los 3 días
(cm) a los 4 días
(cm) a los 10 días
(cm) a los 11 días
T0
3,50
a
4,77
a
8,80
a
9,00
a
N1C1E1
3,48
a
4,95
a
8,77
a
8,77
a b
N1C2E1
2,89
b
4,22
b
8,58
b
8,58
b
N1C3E1
2,62
b
3,72
b
7,34
b
7,97
c
Nota: N 1: representa el extracto vegetal (Nicotiana tabacum); T0: es el testigo; C: es la concentración a la que se
encuentra el medio de cultivo más el extracto etanólico de tabaco (C1: 4000 ppm; C2: 6000 ppm; C3: 8000 ppm); E
1: es la enfermedad involucrada en el estudio (P. palmivora); Valores con la misma letra no son
significativamente diferentes (p > 0,05).
Las colonias de P. palmivora aislada de Balsa (Ochroma pyramidale) presentaron las siguientes
características macroscópicas, la expansión de la colonia en la caja Petri solo con el medio de
cultivo sin modificación fue de tipo petaloide y rastrera, donde el micelio presento un tono
blanco (Figura 1A). El tratamiento N1C1E1 presento una tonalidad verde con presencia de
micelio similar al testigo (Figura 1B); el siguiente tratamiento presento un tono verde kiwi que a
sus vez mostro una baja presencia de micelio en comparación a N1C1E1 y T0 (Figura 1C),
mientras que la coloración verde oliva en el tratamiento N1C3E1 presentó disminución de
micelio en comparación al resto de tratamientos (Figura 1D). En cada medio de cultivo
modificado con el extracto de tabaco la morfología del crecimiento de la colonia de P. palmivora
resultó de forma estrellada.
A
B
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA
BAJO CONDICIONES IN VITRO
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Figura 1. Efecto del extracto etanólico de tabaco sobre el crecimiento de la colonia en medio de cultivo V8
modificado. Testigo (A); Tratamientos N1C1E1 (B); N1C2E1 (C) y N1C3E1 (D).
Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial de P. palmivora
En la Figura 2 se observa la acción inhibitoria de cada tratamiento, donde solo un tratamiento
resulto estadísticamente diferente, alcanzando un porcentaje de inhibición del 11,44%, este
resultado se obtuvo con la concentración de 8000 ppm, presentado diferencia estadísticamente
significativa entre N1C3E1 y el resto de los tratamientos. Esta figura demuestra la efectividad
biocida de la mayor concentración comparada con el resto de las concentraciones; la presencia
de alcaloides, saponinas, flavonoides, cumarinas y otros compuestos con propiedades biocidas
afectaron la velocidad de crecimiento y producción de micelio de P. palmivora.
C
D
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA
BAJO CONDICIONES IN VITRO
90
Figura 2. Porcentaje de inhibición de P. palmivora tratada con diferentes concentraciones del extracto vegetal en
base al crecimiento radial (cm).
Nota: Valores con la misma letra no son significativamente diferentes (p > 0,05)
Análisis microscópico del efecto del extracto etanólico de tabaco sobre P. palmivora y su
efecto sobre la germinación de zoosporas
La evaluación microscópica en las placas de los tratamientos demostró la presencia de
esporangios en T0 (Figura 3E). El desarrollo de clamidosporas en cantidades leves en
N1C1E1(Figura 3F). El aumento moderado de clamidosporas en el tratamiento N1C2E1 (Figura
3G), mientras que en N1C3E1 presento producción masiva de clamidosporas (Figura 3H).
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA
BAJO CONDICIONES IN VITRO
91
Figura 3. Esporangios en testigo (E); Clamidosporas en tratamientos (F), (G) y (H).
El análisis cualitativo llevado a cabo se muestra en la Tabla 5, donde la presencia de micelio en
los tratamientos T0 resulto en cantidades altas; N1C1E1 presento un desarrollo moderado,
mientras que N1C2E1 y N1C3E1 presentaron un leve crecimiento del micelio. La producción de
clamidosporas en T0, N1C1E1 y N1C2E1 se encontraron dentro del rango 4, sin embargo,
N1C3E1 tuvo un valor de 5 en la producción de clamidosporas.
E
F
G
H
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA
BAJO CONDICIONES IN VITRO
92
Tabla 5. Análisis cualitativo de la presencia de micelio y cuantitativo de clamidosporas por campo microscópico.
Tratamiento
Presencia de
micelio
Producción
clamidosporas
T0
+++
4
a
N1C1E1
++
4
a
N1C2E1
+
4
a
N1C3E1
+
5
b
+: leve; ++: moderada; +++: alta
Nota: Valores con una misma letra no son significativamente diferentes (p > 0,05)
Los resultados de los análisis cualitativos en todos los tratamientos se observan en la Tabla 6,
donde todos presentaron germinación moderada de zoosporas, durante la evaluación de
movilidad a las 15 horas T0, N1C1E1, N1C2E1 mostraron movimiento moderado, a diferencia de
N1C3E1 la cual tuvo una leve actividad, los tratamientos T0, y N1C1E1 a las 32 horas
presentaron alta movilidad de zoosporas, mientras que N1C2E1 mantuvo actividad moderada y
N1C3E1 conservo una leve movilidad durante la evaluación.
Tabla 6. Análisis cualitativo de la germinación de zoosporas y movilidad.
Tratamiento
Germinación
Movilidad 15h
Movilidad 32 h
T0
++
++
+++
N1C1E1
++
++
+++
N1C2E1
++
++
++
N1C3E1
++
+
+
+: leve; ++: moderada; +++: alta
DISCUSIÓN
El análisis de las características fisicoquímicas del material precursor abordaron porcentajes de
humedad del 13,57%, cenizas con un resultado del 13,86% indicando la presencia de minerales
y compuesto inorgánicos; el valor del pH fue de 3,93 siendo un indicativo de acidez, los datos
obtenidos presentaron diferencias significativas en comparación al estudio de Capdesuñer et al.
(24), el cual menciona que el pH se encuentra entre 5,8; cenizas en un intervalo de 24 y 29%; el
contenido de humedad no cuenta con un valor dentro del estudio, por lo cual la siguiente
investigación sugiere que el contenido de humedad es 13,57%, cabe mencionar que los valores
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA
BAJO CONDICIONES IN VITRO
93
reportados en esta investigación son diferentes a otros estudios, debido a varios aspectos como
el origen de la materia vegetal, la variedad, la época de recolección y el tratamiento durante la
plantación.
El contenido de nicotina en el extracto de tabaco fue de 3,19%, similar al reportado por Banožić
et al. (10), quien obtuvo un valor entre el 2,4-4,3%, además de emplear diferentes métodos de
extracción de los residuos de tabaco, como la asistida por ultrasonidos, fluido súper crítico,
entre otros.
Las características morfológicas de la colonia P. palmivora en T0 fueron: crecimiento del micelio
de tipo petaloide y en tono blanco, siendo similares a la investigación realizada por López-Galé
et al.(25), que aisló P. cinnamomi en medio de cultivo PDA, dando a conocer que la morfología
entre estas dos variedades de Phytophthora son similares a nivel macroscópico. En esta
investigación el medio de cultivo V8 modificado presento cambios de coloración debido a la
presencia de clorofila propia de los residuos del tabaco, adquiriendo una pigmentación verde en
diferentes tonalidades, a causa de las cantidades empleadas en cada concentración; cada
tratamiento presento una menor velocidad de expansión de la colonia y reducida producción de
micelio, a su vez se observó que el crecimiento de la colonia de P. palmivora en el medio
modificado tenía un patrón en forma de estrella (26).
En la evaluación microscópica realizada a la placa T0 se observó la presencia de esporangios, los
cuales mostraron una forma ovoide (26), mientras que el resto de los tratamientos presentaron
un aumento gradual de clamidosporas; la actividad de las zoosporas en el extracto etanólico de
tabaco a distintas concentraciones no presentaron cambios durante las primeras horas de
evaluación, sin embargo, a las 32 h se observó que N1C3E1 aplaco el movimiento de las
zoosporas; estas respuestas se deben al estrés causado por los metabolitos secundarios
presentes en el extracto tales como alcaloides, saponinas, fenoles, flavonoides, terpenos,
cumarinas, y demás compuestos con propiedades biocidas (16). Cabe mencionar que la nicotina
fue el principal alcaloide presente en el extracto etanólico de Nicotiana tabacum, causante de
las alteraciones en el comportamiento, crecimiento y desarrollo de P. palmivora a nivel in vitro,
además la técnica de dilución del extracto en el medio V8 permitió una mayor difusión de los
componentes del extracto en el medio.
Debido al efecto que presento el extracto etanólico de tabaco, se propone se efectúen más
estudios para determinar su potencial para el control de microorganismos fitopatógenos que
afecten cultivos de alto valor económico, aplicando concentraciones más altas que las utilizadas
en esta investigación, ya sea en campo o durante su periodo de desarrollo. Se debe tener en
cuenta que el procedimiento para estandarizar el estudio de plantas con propiedades biocidas
es difícil, debido a factores que pueden influir de manera significativa en los resultados, tales
como la composición del medio de cultivo empleado, el método de extracción, pH, la solubilidad
de la muestra en el medio y el microorganismo en cuestión (27).
EFECTO BIOCIDA DEL EXTRACTO DE TABACO (NICOTIANA TABACUM), APLICADO A PHYTOPHTHORA PALMIVORA
BAJO CONDICIONES IN VITRO
94
CONCLUSIONES
Los resultados demostraron que el tratamiento N1C3E1 tiene potencial para usarse como
método inhibitorio por haber presentado un menor crecimiento de la colonia del patógeno P.
palmivora con un valor de 7,97 cm, adicional a esto no se observaron estructuras como
esporangios o zoosporas, sin embargo, se evidencio mayor presencia de clamidosporas en
respuesta al estrés causado por el tratamiento aplicado, debido a la nicotina presente en los
medios de cultivo modificados, siendo una de las causas de alterar el comportamiento y aspecto
morfológico de P. palmivora. En cuanto al efecto que tuvo el extracto en las zoosporas, estas no
presentaron cambios durante las primeras horas de evaluación, sin embargo, a las 32 h se
observó que N1C3E1 disminuyo la actividad de movilidad de las zoosporas, en contraste al resto
de tratamientos que mantuvieron una movilidad moderada.
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos sinceramente el apoyo y servicio de la empresa Plantaciones de Balsa PLANTABAL
S.A, a la Ing. Cinthia Zambrano gerenta del área de Tecnología y Desarrollo Silvícola por la
apertura para llevar a cabo la investigación en las instalaciones. Al Ing. Bernardo Castro del
departamento de Manejo Integral de Plagas y Enfermedades (MIPE), por proporcionar la cepa P.
palmivora de la colección de balsa; por su ayuda en el análisis estadístico de los resultados y
asistencia técnica. Pedimos disculpas de antemano si se omitió a alguien que contribuyo a este
proyecto.
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